Phản ứng kết tủa vòng được ứng dụng nhiều trong chẩn đoán bệnh nhiệt thán, gọi là phản ứng kết tủa của Ascoli (hình 23b). Dung dịch kháng nguyên Vòng ngưng kết Kháng huyết thanh Kháng huyết thanh 0,5ml Kháng nguyên 0,5ml Kháng nguyên âm 0,5ml Kháng nguyên Vòng trắng đục Kháng huyết Kháng nguyên âm Hình 22a. Phản ứng kết tủa vòng Hình 22b. Phương pháp làm phản ứng Ascoli 78 1.2. Phản ứng kết tủa trong ống nghiệm Là phản ứng vừa có tính định tính, vừa có tính định lượng. Dùng một loạt ống nghiệm, cho huyết thanh đều vào các ống nghiệm đó, sau đó cho kháng nguyên vào với lượng từ ít đến nhiều. Kết quả sẽ thấy có kết tủa xảy ra càng rõ tại những ống có kháng nguyên vừa đủ với kháng thể, còn ở những ống có thừa kháng nguyên thì kết tủa không xảy ra. 1.3. Phản ứng kết tủa trong môi trường đặc Cho kháng nguyên và kháng thể gặp nhau trong môi trường thạch và quan sát đường kết tủa. Kháng nguyên Vùng trung gian Kháng thể Hình 23. Miễn dịch khuếch tán đơn (A) và miễn dịch khuếch tán kép (B) trong ống nghiệm 79 Nguyên lý: Lợi dụng tính chất khuếch tán của chúng về phía nhau, rồi gặp nhau, kết hợp với nhau bão hòa và kết tủa ở vùng có tỷ lệ tương ứng đồng đều giữa kháng nguyên và kháng thể. Phản ứng kết tủa khuếch tán trong thạch ống nghiệm (Kỹ thuật Oudin): Có thể chia làm hai loại: Phản ứng kết tủa khuếch tán đơn và kép. Phản ứng kết tủa khuếch tán trong thạch đơn Thạch đã trộn sẵn kháng thể (hoặc kháng nguyên) rồi cho vào trong ống nghiệm trước, sau đó cho lên mặt thạch một lượng dung dịch kháng nguyên (hoặc kháng thể). Kháng nguyên (hoặc kháng thể) sẽ khuếch tán vào trong thạch đi xuống phía dưới và sẽ gặp kháng thể (hoặc kháng nguyên) đã có trong đó kết hợp, bão hòa, và kết tủa thành đường màu trắng. Nếu dùng nhiều đôi kháng nguyên và kháng thể khác nhau trong cùng một ống nghiệm để chẩn đoán thì sẽ xuất hiện nhiều đường kết tủa riêng rẽ ở độ nông sâu khác nhau theo từng cặp kháng nguyên-kháng thể tương ứng. 1.4. Phản ứng kết tủa khuếch tán trong thạch kép Cho kháng thể vào trước, rồi cho vào trên kháng thể một lớp thạch bình thường: (không chứa kháng nguyên, kháng thể). Sau đó cho lên mặt thạch dung dịch kháng nguyên hòa tan (hoặc là ngược lại). Kháng nguyên bên trên sẽ khuyêch tán xuống dưới và đi vào trong thạch, và kháng thể bên dưới khuế ch tán lên trên cũng đi vào trong thạch, gặp nhau ở một nơi nào đó, kết hợp bão hòa và kết tủa. Phản ứng kết tủa khuếch tán trong thạch trên phiến kính hoặc trên đĩa petri, khi thạch đông đặc, đục các lỗ tròn nhỏ có kích thước và khoảng cách bằng nhau, tthường đục một cụm 6 lỗ, 1 lỗ trung tâm và 5 lỗ xung quanh. 80 Nhỏ vào lỗ trung tâm kháng nguyên hoặc kháng thể chuẩn đã biết, còn các lỗ xung quanh nhỏ kháng thể hoặc kháng nguyên cần chẩn đoán, chúng sẽ khuếch tán về phía nhau và xuất hiện vạch kết tủa, nếu kháng nguyên và kháng thể tương ứng. I II Hình 24a (Theo Ian R. Tizard. 2004) I. Định hiệu giá huyết thanh II. Định hiệu gía kháng nguyên 1 - Kháng nguyên 1 - Kháng thể 2, 3, 4, 5, 6 - kháng thể pha loãng 2, 3, 4, 5, 6 - kháng thể pha loãng lần lượt từ: 1/2, 1/4, 1/8, 1/32 lần lượt từ: 1/2, 1/4, 1/8, 1/32 I II Hình 24b (Theo Ian R. Tizard. 2004) I. Định loại kháng nguyên II. Định loại kháng thể 1 - Kháng thể đã biết 1- Kháng nguyên đã biết 2, 3, 4, 5 - kháng nguyên chưa biết 2, 3, 4, 5 - kháng thể chưa biết 6 - kháng nguyên tương ứng 6 - kháng thể tương ứng Phản ứng dương tính Phản ứng âm tính 81 Hình 24c. Phản ứng kết tủa khuyếch tán làm trên đĩa lồng (Theo Ian R. Tizard. 2004) A B C Hình 25. Hiện tượng hai kháng nguyên: Không đồng nhất (A); đồng nhất (B); đồng nhất một phần (C) phát hiện bằng phản ứng Ouchterlon y . 2. Phản ứng miễn dịch đánh dấu enzym (ELISA - Enzym - Linking - Immunosorbent Assay). Đ y là một trong nhữnng phương pháp quan trọng được ứng dụng rộng rãi trong chẩn đoán thú y. 2.1. Phản. kháng nguyên II. Định loại kháng thể 1 - Kháng thể đã biết 1- Kháng nguyên đã biết 2, 3, 4, 5 - kháng nguyên chưa biết 2, 3, 4, 5 - kháng thể chưa biết 6 - kháng nguyên tương ứng 6 - kháng.
( tác giả : Phạm Minh Đức )
Không có nhận xét nào:
Đăng nhận xét